LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

作者：卢月梅; 张阮章; 胡玉华; 钟运华; 武学成; 陈升汶; 王沙燕

来源：中国人兽共患病学报, 2010, (03): 266-268.

• β-内酰胺酶
• 原核表达
• 等电聚焦电泳 β-lactamase
• prokaryotic expression
• isoelectric focusing electrophoresis

目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b( )表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔p...

• 单位
  暨南大学; 深圳市人民医院