苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR方法的建立

作者：师永霞^*; 戴俊; 袁帅; 黎东红; 孙芳芳; 郑夔; 黄吉城

来源：中国国境卫生检疫杂志, 2018, 41(06): 396-405.

DOI：10.16408/j.1004-9770.2018.06.002

• 苏丹型埃博拉病毒
• 实时荧光PCR
• 灵敏度
• 特异性

目的建立苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,为埃博拉病毒分型检测提供技术储备。方法比较15株埃博拉病毒基因序列的保守性和特异性,设计3对引物和探针用于苏丹型埃博拉病毒核酸检测。使用不同浓度的苏丹型埃博拉病毒RNA对照进行检测,确定最佳的引物探针组合、引物探针用量和Mg2+用量,建立苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和精密度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查。结果经筛选,设计的引物、探针Ebv-S-2F/Ebv-S-2R/Ebv-S-2P对1.6×102～1.6×105拷贝/ml的阳性对照检出率为100.0%,是最佳的引物探针组合。优化后的实时荧光PCR体系引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。灵敏度为80拷贝/ml,重复性好,特异性强,对扎伊尔型、科特迪瓦型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照,马尔堡病毒阳性对照、登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒等检测结果均为阴性。结论建立的苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别。

• 单位
  广东检验检疫技术中心