BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作者：刘昱成; 王国超; 孟庆玲; 乔军; 才学鹏; 贺志昊; 杨海波; 万鹏; 陈创夫

来源：西北农业学报, 2014, 23(02): 30-34.

• BVDV
• E2基因
• 载体构建
• 真核表达

根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2。用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化酵母GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用φ=1.5%甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为23.2ku;Western blot分析表明,该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 石河子大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所