A型肉毒毒素轻链的原核表达、纯化及活性鉴定

作者：罗森; 齐芬芳; 宫路路; 刘昊; 李涛; 王慧

来源：生物技术通讯, 2015, 26(05): 632-635.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2015.05.009

• A型肉毒毒素轻链
• 金属内肽酶
• 原核表达

目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,IPTG诱导目的蛋白高效表达,表达产物经Ni螯合亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论:构建了重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,原核表达获得高水平可溶性重组Bo NT/A LC,纯化得到纯度较高的蛋白质,重组Bo NT/A LC的酶活略高于A型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于Bo NT/A LC抑制剂高通量体外检测方法研究。

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 遵义医药高等专科学校