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摘要
目的:应用RNA干扰技术构建BimS慢病毒RNA干扰载体,探讨其感染效率和干扰效果。方法:针对人BimS设计3个干扰靶点,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入AgeI和EcoRI双酶切线性化载体中。将重组质粒进行病毒包装、并且通过感染ACC-2细胞观察其感染效率,定量PCR检测其对BimS mRNA干扰效果。结果:PCR产物经扩增电泳后阳性克隆得到337bp条带,插入序列片段与DNA测序结果完全相符。重组慢病毒载体在293T细胞中包装获得滴度为2×108 TU/ml的病毒颗粒,MOI=20,转染效率为85%。转染pFU-GV-BmS-1组、pFU-GV-BmS-2组及对照组BmS mRNA相对表达水平分别为:0.743±0.025、0.466±0.023、1.266±0.042(组间两两比较,P<0.05)。结论:BimS慢病毒RNA干扰载体构建成功,并能高效感染ACC-2细胞及下调BmS mRNA表达。
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