轮状病毒NSP5真核表达载体的构建、鉴定及功能研究

作者：陈林林; 周艳; 林晓晨; 杜静; 刘洋; 汪艺; 李鸿钧^*

来源：生物学杂志, 2019, 36(06): 12-16.

• 轮状病毒
• NSP5
• 真核表达载体
• 病毒复制

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表达差异。随后,重组质粒转染组及对照组细胞分别接种相同剂量的RV,一定时间后根据GFP分布来确认重组蛋白NSP5在细胞内的迁移变化情况,并比较实验组和对照组之间的RV复制能力差异。结果发现,NSP5蛋白在重组质粒转染细胞48 h后表达达到顶峰。此外,GFP也显示NSP5蛋白随RV的感染从弥散状转变为点状聚集,且转染该重组质粒的细胞内RV复制水平明显高于对照细胞。说明了轮状病毒NSP5对病毒的复制具有明显促进作用,这也为深入了解RV的感染、复制及致病机理提供理论基础。

• 单位
  中国医学科学院医学生物学研究所