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摘要
目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件。方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30 min,以激活T细胞。随后,通过细胞自动计数,检测不同激活条件对细胞活力和直径的影响;利用流式细胞术检测CD3+T细胞所占比例;连续监测并绘制T细胞生长曲线,分析激活条件对T细胞增殖速度的影响。结果:以3种激活条件处理的细胞,在激活早期,细胞活力随着磁珠数的增加而降低;流式细胞术检测结果表明,随着磁珠数的降低,CD3+T细胞所占比例呈上升趋势。然而,只有当PBMCs数与磁珠数比例为1∶1时,T细胞的生长速度最快,在第15 d时可扩增50倍。结论:T细胞激活条件对细胞活力及增殖有重要影响,PBMCs数与磁珠数比例为1∶1有利于T细胞快速扩增,这对在较短时间内获得足够的T细胞,缩短整个CAR-T细胞制备周期具有较重要的意义。
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