转录通读环状RNA rt-circ-HS促进低氧诱导因子1α表达和肾癌细胞增殖与侵袭

作者：许云屹; 苏征征; 郑林茂; 张孟尼; 谭珺娅; 杨亚蓝; 张梦鑫; 徐苗; 陈铌; 陈雪芹; 周桥^*

来源：北京大学学报(医学版), 2023, 55(02): 217-227.

DOI：10.19723/j.issn.1671-167X.2023.02.004

• 转录通读环状RNA HIF1α-SNAPC1
• 肾细胞癌
• 低氧诱导因子1α
• 小核RNA激活复合多肽1
• 微小RNA 539

目的：鉴定肾癌细胞中由染色体14q23上相邻基因低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1α)和小核RNA激活复合多肽(small nuclear RNA activating complex polypeptide 1,SNAPC1)形成的转录通读RNA及转录通读环状RNA(read-through circular RNA HIF1α-SNAPC1, rt-circ-HS),研究rt-circ-HS在肾癌细胞及组织样本中的表达、对肾癌细胞生物学行为的影响以及对其亲本分子HIF1α的调控机制。方法：逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和Sanger测序检测不同肿瘤细胞中由HIF1α-SNAPC1形成的转录通读RNA和rt-circ-HS的表达。构建不同类型的肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)组织芯片共437例，用原位杂交检测rt-circ-HS表达。采用小干扰RNA(small interference RNA,si-RNA)和人工过表达质粒干预rt-circ-HS,用细胞计数实验(cell counting kit 8,CCK8)、EdU掺入实验、Transwell细胞迁移和细胞侵袭实验分别检测rt-circ-HS对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。用RT-PCR和Western blot验证干预rt-circ-HS对亲本分子HIF1α和SNAPC1表达的影响。构建包含rt-circ-HS、HIF1α 3′端非翻译区(3′untranslated region, 3′UTR)与微小RNA 539(microRNA 539,miR-539)结合序列的野生型和突变型质粒，用双荧光素酶报告基因系统检测rt-circ-HS、HIF1α 3′UTR与miR-539的结合。结果：发现一个新的rt-circ-HS,由HIF1α外显子(exon) 6-SNAPC1 exon 2转录通读本产生，在肾癌细胞786-O中高表达。Sanger测序证实rt-circ-HS全长1 144 nt,包括HIF1α exon 2-exon 6和SNAPC1 exon 2-exon 4,是一个新的转录通读环状RNA。原位杂交结果显示，rt-circ-HS在RCC中阳性表达率为67.5%(295/437),在不同类型RCC中表达率不同。发现miR-539是HIF1α的转录后负调控分子；rt-circ-HS作为分子海绵与miR-539结合，竞争性抑制miR-539与HIF1α 3′UTR的结合，解除其对HIF1α的转录后负调控作用，促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论：rt-circ-HS作为分子海绵结合miR-539,抑制其对HIF1α的负调控作用，促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。

• 单位
  公共卫生学院; 四川大学华西医院; 四川大学