犬细小病毒、犬冠状病毒和犬轮状病毒三重PCR方法的建立及初步应用

作者：沙聪; 唐川杰; 何雨薇; 李妍; 黄坚^*

来源：西南民族大学学报(自然科学版), 2023, 49(02): 142-148.

• 犬细小病毒(CPV)
• 犬冠状病毒(CCoV)
• 犬轮状病毒(CRV)
• 三重PCR
• 腹泻

犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)、犬冠状病毒(Canine coronavirus, CCoV)和犬轮状病毒(Canine rotavirus, CRV)是引起犬腹泻的主要病原.3种病原引发的疾病临床症状相似，难以诊断，因此需要建立可以高效鉴别这3种病原的分子检测方法.通过对引物浓度、退火温度的条件优化，建立了可同时检测CPV、CCoV和CRV 3种病毒的三重PCR方法，并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示，该方法可特异性扩增CPV VP2基因(253 bp)、CCoV ORF-1b基因(379 bp)和CRV VP6基因(852 bp)的目的片段，未检出其他相关病原；对CPV、CCoV和CRV的最低检测浓度分别为6.44×10-1 pg/μL、8.72×10-1 pg/μL和8.35×10-1 pg/μL,方法的灵敏度高；重复性试验显示该方法具有良好的稳定性.应用建立的三重PCR方法对2019～2020年成都市区采集的135份犬腹泻粪便样本进行了检测，并与单重PCR检测结果相比较.结果显示CPV、CCoV和CRV的检出率分别为16.30%、20.74%和4.44%;总感染率为51.11%(65/135)),其中多病原混合感染率为20.00%(13/65),检测结果与单重PCR相符.建立的三重PCR方法，可以用于相关病原的临床检测和流行病学调查.

• 单位
  西南民族大学