PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价

作者：栾慧; 龚俊; 赵馨雨; 危艳武; 李刚; 刘长明; 刘思国; 张万江; 王春来^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(01): 65-71.

• PCV2
• 副猪嗜血杆菌
• 亚单位疫苗
• 小鼠免疫效果

为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果，本研究将猪圆环病毒2型(PCV2) cap基因克隆至p MAL-c5X载体中，并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的r Cap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合，表明r Cap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白r Cdt B、r Afua和r OPPA，与r Cap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗，疫苗中各蛋白(rCdtB、r Afua、r OPPA、r Cap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组，采用背部多点注射方式免疫，首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血，通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体，结果显示，二免后14 d，免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001)；利用PCV2免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)抗体检测试剂盒检测各组小鼠血清抗体，结果显示在攻毒前PBS组均未检测到PCV2抗体，免疫组二免后14 d抗体水平为1∶800。二免后14 d，将免疫组和PBS组各随机分为3组(每组10只小鼠)进行攻毒保护试验，结果显示二联苗对PCV2攻毒组小鼠的免疫保护率为80%，对HPS5型HN10株攻毒组小鼠的免疫保护率为70%，与对照组比较差异极显著(P<0.01)；对HPS13型ZD12株攻毒组小鼠的免疫保护率为80%，与对照组比较差异极显著(P<0.001)。上述结果首次表明，原核表达的r Cap具有良好的免疫原性，PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠具有一定的保护效果，为后续PCV2-HPS二联亚单位疫苗的研究奠定了实验基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所