RNA结合基序蛋白15B对胰腺癌细胞增殖与侵袭功能的影响及其机制

作者：谭淳中; 夏鹏; 郭德良; 杨张朔; 刘朋朋; 张浩; 刘志苏^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(06).

• RNA结合基序蛋白15B
• 胰腺癌
• 增殖
• 侵袭
• Hippo通路

目的观察RNA结合基序蛋白15B(RBM15B)在胰腺癌(PC)的表达并探讨其与胰腺癌细胞增殖、侵袭的关系。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测RBM15B在80例PC组织、癌旁组织、胰腺癌细胞系(SW1990、HPAFII)和人类正常胰腺细胞(HPDE)中的mRNA和蛋白表达量。实验组转染sh1-RBM15B、sh2-RBM15B, 对照组转染sh-NC, 获得稳定的敲低RBM15B和对照SW1990细胞系。细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验、克隆形成实验观察敲低RBM1B的实验组与NC对照组细胞增殖能力;Transwell侵袭实验研究敲低RBM1B的实验组与NC对照组细胞侵袭能力;RNA-seq研究RBM15B涉及的下游信号通路。两组间比较采用独立样本t检验、χ2检验。结果胰腺癌组织RBM15B的蛋白表达量显著高于癌旁组织(2.87±0.41比1.07±0.38, t=5.623, P<0.01)。RBM15B mRNA表达水平与胰腺癌患者的TNM分期(χ2=4.363, P<0.05), 肿瘤直径(χ2=6.626, P<0.05)和淋巴结转移(χ2=4.949, P<0.05)显著相关。胰腺癌细胞系RBM15B蛋白水平显著高于正常胰腺细胞系(SW1990:3.34±0.44;HPAFII:2.76±0.32比HPDE:0.81±0.17, t=6.421、4.779, P<0.01), 差异有统计学意义。低表达组SW1990在72 h细胞吸光度值显著低于对照组SW1990的吸光度(1.02±0.11、1.35±0.13比1.96±0.14, t=4.007、3.748, P<0.01)。低表达组SW1990形成的克隆集落数显著少于对照组SW1990数量(64.57±4.77、134.26±10.32比193.74±19.58, t=4.766、3.595, P<0.05)。低表达组SW1990穿过基底膜的细胞数量显著少于对照组SW1990数量(36.48±3.73、47.68±4.29比105.32±13.23, t=7.471、4.617, P<0.05)。RNA-seq富集分析结果提示, 差异基因显著富集在Hippo信号通路;低表达组SW1990的Yes相关转录调控因子(YAP)表达水平显著低于对照组SW1990的YAP表达水平(1.78±0.12、1.12±0.09比2.45±0.21, t=5.458、6.897, P<0.01);低表达组SW1990的磷脂-溶血磷脂转酰基酶(TAZ)表达水平显著低于对照组SW1990的TAZ表达水平(1.35±0.08、1.47±0.07比2.13±0.17, t=6.430、3.791, P<0.05)。结论 RBM15B在PC组织和细胞中相较于癌旁组织和正常胰腺细胞表达明显升高, 且与患者TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移显著相关, RBM15B通过Hippo通路促进了其增殖、侵袭能力。

• 单位
  武汉大学中南医院