沉默NOX4对百草枯诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

作者：李咏; 程静; 卢立; 贺文娟; 刘立; 宋红萍; 吴涛^*

来源：实用药物与临床, 2022, 25(06): 486-491.

DOI：10.14053/j.cnki.ppcr.202206002

• 还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4
• 百草枯
• 小干扰RNA
• 肺纤维化
• 活性氧
• 细胞凋亡

目的 通过siRNA沉默人肺泡Ⅱ型上皮样A549细胞中NOX4基因，探讨NOX4在百草枯诱导肺泡上皮细胞凋亡中的作用。方法 根据GeneBank中NOX4全长cDNA序列，选取特异性序列为干扰作用的靶点，构建NOX4 siRNA表达载体，脂质体介导转染A549细胞，筛选出最佳干扰siRNA。实验设置正常对照组、PQ组、PQ+转染组及转染对照组。正常对照组仅给予培养基处理24 h, PQ组加入百草枯(700μM)处理24 h, PQ+转染组给予NOX4 siRNA转染细胞48 h后，用含百草枯(700μM)的DMEM培养液培养24 h,转染对照组仅加入NOX4 siRNA。结果 与正常对照组相比，PQ组A549细胞活力下降，细胞凋亡率显著升高，NOX4表达明显增加，MDA含量显著增加，ROS水平明显升高；与正常对照组相比，转染对照组仅见NOX4表达显著降低；而与PQ组相比，PQ+转染组细胞活力上升，细胞凋亡率显著减低，NOX4表达明显降低，MDA含量显著减少，ROS水平亦显著下降。结论 降低NOX4表达可抑制PQ诱导的A549细胞氧化应激和凋亡。这一结果可能为肺纤维化提供了新的治疗靶点。