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摘要
为分析天然小分子药物小檗胺(BBM)是否影响牛肠道病毒(BEV)的复制，本研究以不同浓度的BBM与牛肾细胞(MDBK)共孵育后，采用MTT法检测BBM对MDBK细胞的影响，结果显示，与对照浓度相比，1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L BBM对细胞增殖抑制作用均较小(P>0.05)。因此选择上述3种浓度的BBM分别处理MDBK 12 h后以103TCID50BEV感染，24 h后采用间接免疫荧光试验(IFA)检测BEV双链RNA (dsRNA)，以确定BBM对BEV的最佳抑制浓度。MDBK细胞经10μmol/L BBM处理后感染BEV，观察48 h内BEV致细胞病变效应(CPE)，采用荧光定量PCR检测BEV 5’UTR m RNA转录水平及测定子代病毒滴度，以确定BBM体外对BEV的抑制效果。IFA结果显示，与对照组相比，10μmol/L BBM对BEV ds RNA具有极显著性抑制作用(P<0.01)；细胞形态观察结果显示，BBM对BEV引起的细胞大面积脱落具有一定的抑制效果；荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，在感染48 h的细胞中BEV 5’UTR m RNA转录水平极显著降低(P<0.01)；子代病毒滴度测定结果显示，在BEV感染24 h和36 h时子代病毒滴度极显著降低(P<0.01)。小鼠预防试验时将24只BALB/c小鼠均分为3组，分别为对照组(0)、低剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)，每日将BBM灌胃1次。给药后3 d滴鼻感染1015TCID50BEV，间隔48 h重复感染一次。感染后分别于5 d、10 d剖杀各组小鼠并采集各组织，采用荧光定量PCR检测BEV 5’UTR m RNA的转录水平。小鼠感染治疗试验时将48只BALB/c小鼠均分为BEV阳性对照组(BEV/DMSO)、感染给药组(BEV/BBM)、给药对照组(BBM),BEV阳性对照组和BEV/BBM组小鼠滴鼻感染1015TCID50BEV后，各组每天按原剂量灌胃BBM一次，感染后0、3 d、6 d和10 d剖杀各组小鼠并采集各组织，检测BEV 5’UTR m RNA的转录水平，并制备病理切片观察各组织的病变。BALB/c小鼠预防试验结果显示，各浓度BBM均具有显著或极显著抑制BALB/c小鼠肝、脾、肾、小肠组织中BEV 5’UTR m RNA转录水平升高的作用(P<0.05或P<0.01)；与对照组相比，各浓度BBM均具有减轻各组织病变作用。其中高剂量组预防效果最明显，且随给药时间延长预防效果也最好。小鼠治疗试验结果显示，感染BEV后灌胃BBM当日即可抑制BEV在小鼠组织中的复制；病理学观察结果显示，对感染对照组相比，BBM可减轻小鼠各组织充血、出血、炎性细胞浸润等情况。综上所述，本研究首次证实BBM在体内外均具有抑制BEV复制的作用，为牛腹泻病的治疗及开发BBM抗病毒药物提供参考依据。
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