MicroRNA-29b-3p重组腺相关病毒制备及在大鼠前额叶皮质中的表达研究

作者：李茂; 冯建国; 王晓斌; 陈前修; 万运强

来源：中国现代医学杂志, 2017, 27(25): 1-7.

• 腺相关病毒
• mi RNA-29b-3p
• 前额叶皮质
• 大鼠

目的获得表达micro RNA-29b-3p的重组腺相关病毒(rAAV-mi R-29b-3p),并检测其在大鼠前额叶皮质中的感染效果和表达水平。方法将前体mi R-29b-3p基因片段置入AAV表达质粒中构建重组AAV质粒,将重组AAV质粒、包装质粒和辅助质粒通过脂质体Lipa Fiter TM共转染HEK293细胞包装r AAVmi R-29b-3p。从转染的HEK293细胞中收集并通过树脂柱纯化r AAV-mi R-29b-3p,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)测定r AAV-mi R-29b-3p滴度。通过脑立体定位仪注射r AAV-mi R-29b-3p至大鼠前额叶皮质,免疫荧光显微镜观察r AAV-mi R-29b-3p的感染效果,q RT-PCR检测r AAV-mi R-29b-3p表达水平。结果成功包装的r AAV-mi R-29b-3p经纯化后获得了高纯度的r AAV-mi R-29b-3p,q RT-PCR检测r AAV-mi R-29b-3p的病毒滴度达到1.0×1012 vg/ml,经感染21 d后,脑组织前额叶皮质荧光表达明显,mi R-29b-3p表达水平明显提高。结论构建的r AAV-mi R-29b-3p可使大鼠前脑皮层mi R-29b-3p高表达,为进一步研究mi R-29b-3p的生物学功能提供了有效工具。

• 单位
  西南医科大学