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摘要
目的克隆和表达BTBD10基因,为进一步研究BTBD10与胰岛细胞增殖功能提供工具。方法制备兔抗BTBD10多克隆抗体,利用PCR方法扩增BTBD10全长,经Bam H I和Sal I酶切后连接入pET32a原核表达载体,将重组表达质粒pET32a-BTBD10转化大肠杆菌ROSSET,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化,以纯化的BTBD10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗BTBD10的多克隆抗体,利用Western blot方法分析鉴定。结果经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的BTBD10读码框。SDS-PAGE电泳分析显示IPTG诱导后表达约85kU的融合蛋白,...
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