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摘要
目的 构建水通道3（AQP-3）/血凝素（HA）融合标签载体，使用原子力显微镜（AFM）观察AQP-3在细胞膜的分布。方法 采用重叠聚合酶链反应（PCR）法将AQP-3/HA标签基因克隆到AQP-3的DNA序列中，构建真核表达载体，挑取单克隆菌落PCR初步鉴定后进行测序鉴定；质粒转染细胞后，采用免疫荧光标记HA标签蛋白，激光共聚焦显微镜下观察荧光标记并拍照；胶体金标记转染成功的细胞上HA标签，AFM观察胶体金颗粒从而分析AQP-3蛋白分布。结果 将HA标签蛋白插入AQP-3第二个胞外段，即T149-Y150之间，成功构建了融合表达载体pIRES2-AQP3/HA-EGF;共聚焦显微镜观察到转染成功的细胞发绿色荧光，AQP-3/HA融合蛋白呈蓝色荧光，其主要分布于细胞膜；AFM观察到细胞表面凹凸不平并伸出片状伪足和丝状伪足，AQP-3/HA在细胞膜表面分布有差异性，其在突起部位分布较多。结论 将HA标签插入AQP-3第二个胞外段，可减小对其功能影响，联合胶体金和AFM识别HA标签蛋白，能够实现AQP-3在细胞膜的示踪标记。
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