腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响

作者：丛敏; 刘天会; 徐雍; 卢炎; 唐淑珍; 刘晓明; 王宝恩; 贾继东; 尤红

来源：肝脏, 2007, (03): 175-179.

DOI：10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2007.03.007

• 金属蛋白酶组织抑制因子
• 小干扰RNA
• 腺相关病毒
• 肝星状细胞

目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况。方法将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13mRNA及蛋白质表达情况。结果经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P<0.01),而MMP13mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P<0.01)。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达。

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院