平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响

作者：张亚利; 王亚琼; 李红

来源：中华中医药学刊, 2016, 34(01): 79-83.

DOI：10.13193/j.issn.1673-7717.2016.01.022

• 平目方
• 非活动期Graves眼病
• 眼眶脂肪细胞
• 增殖
• 凋亡

目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代。诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞。将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组含药血清。MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响。Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:1原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞。2MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组最为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义。平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P<0.05),作用16 d后更为显著(P<0.01),地塞米松组差异无统计学意义。3Western blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.01),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.01)。其中平目汤(全方)组最为显著,益气+化痰祛瘀组其次。结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用。

• 单位
  上海中医药大学附属龙华医院