构建重组人pET-32a-瘦素高效的表达载体

作者：谢琳; 巫国辉; 李小林; 文辉才

来源：中国组织工程研究, 2012, 16(37): 6926-6930.

DOI：10.3969/j.issn.2095-4344.2012.37.018

• 瘦素
• 重组
• 变性
• 复性
• 克隆
• 原核表达
• 抗原反应原性
• RT-PCR
• 酶联免疫吸附
• 组织工程

背景:瘦素的功能是作为脂肪细胞体脂量的信号来认识的,作为体内的能量平衡信号反馈到下丘脑,与其中各部位神经元的受体结合后参与调节进食、饮水、能量代谢。目的:构建原核重组表达载体pET-32a-瘦素并检测其在大肠杆菌BL21中的高效表达。方法:取人脂肪组织,RT-PCR法制备瘦素目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pMD18T与pET-32a原核表达载体,双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌BL21株诱导其表达,SDS-PAGE电泳分离鉴定,表达产物变性复性后,间接酶联免疫吸附法检测抗原反应原性。结果与结论:实验成功扩增出520bp的瘦素目的基因并构建了原核重组表达载体pET-32a-瘦素;测序结果与GenBank收录序列相一致;目的蛋白pET-32a-瘦素呈极高效表达,占总蛋白的50%以上;变性复性后抗原反应原性较复性前明显提高(P<0.01)。结果证实,实验成功构建原核重组高效表达的载体pET-32a-瘦素,并提高其抗原反应原性。

• 单位
  南昌大学第一附属医院; 江西省人民医院; 南昌大学第二附属医院