重组双特异性抗体药物电荷异质性分析iCIEF方法新载体基质研究及验证

作者：卜令丽; 张瑞宁; 韩国华; 刘振东; 王庆民^*

来源：药物分析杂志, 2022, 42(11): 1927-1935.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2022.11.08

• 双特异性抗体
• 电荷异质性
• 甘油
• 载体基质
• 成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)
• 方法验证

目的:建立应用成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)法测定重组双特异性抗体(bsAb)电荷异质性的新载体基质的方法。方法:首先，对2种bsAbs在传统的载体基质甲基纤维素(MC)/羟丙甲基纤维素(HPMC)与新的甘油基质中的电荷异构体分离效果进行对比；然后，对甘油基质方法进行进一步优化，以研究甘油浓度、两性电解质种类及其终浓度、不同pH范围两性电解质的组合方式等对电荷异构体分离效果的影响，获得基于甘油基质最佳的分析条件；最后，应用甘油基质的最优分离条件进行了iCIEF方法验证，包括精密度、准确度、线性范围及稳定性指示性验证等。结果:2种bsAbs在甘油基质中的电荷异构体的分离效果均优于HPMC载体基质，且方法的稳健性较好；方法验证结果显示：对于bsAb 1,酸区、主峰、碱区峰峰面积百分比的RSD均小于2.0%,精密度良好；在蛋白终浓度0.10～0.30 mg·mL-1范围内，主峰平均峰面积与蛋白浓度回归曲线r大于0.99,线性良好；每个浓度点的回收率均在95%～105%范围内，准确度良好。对于bsAb 2,酸区、主峰峰面积百分比RSD均小于2.0%,碱区峰面积百分比小于20.0%,精密度良好。该方法能够指示出产品电荷异构体的含量变化情况，可用于产品的质控。结论:使用甘油作为新的载体基质代替传统的HPMC载体基质进行iCIEF分析，具有分离度较好，稳定性强，准确性高，成本低等优势，解决了结构较复杂的重组双特异性抗体类药物在传统MC/HPMC载体基质中无法实现电荷异构体良好分离的难题，尤其适用于复杂的双特异抗体类药物的产品质量评估及质量控制。