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摘要
旨在研究长链非编码RNA（lncRNA）对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。本研究以体外分离培养的鲁西黄牛胎牛原代骨骼肌卫星细胞为试验材料，体外诱导成肌分化，以前期高通量测序筛选出来肌肉组织特异性表达的lncRNA为靶标，通过RACE技术对其进行全长扩增，命名为lncbMD，对lncbMD进行生物信息学分析和亚细胞定位。收取增殖期和分化期第1、2、3天的细胞，提取RNA（每组设置4个重复）或蛋白质（每组设置3个重复），通过qRT-PCR检测lncbMD在牛骨骼肌卫星细胞分化进程中不同时期的表达情况。根据lncbMD的序列设计合成干扰RNA，转染牛骨骼肌卫星细胞干扰lncbMD的表达，利用EdU试验检测细胞增殖情况，qRT-PCR技术检测lncbMD干扰效果、lncbMD的mRNA表达水平，增殖标志因子Pax7、Cyclin D1以及分化标志因子MyoG、MyHC的mRNA表达水平，荧光倒置显微镜观察细胞生长情况。结果显示，lncbMD全长序列1 902 nt，位于牛基因组23号染色体上，不具有编码潜能，是一条未报道的lncRNA。在牛骨骼肌卫星细胞与肌管中均主要存在于细胞核，在牛骨骼肌卫星细胞成肌分化前后的mRNA表达水平有极显著差异（P<0.01）。干扰lncbMD后，EdU细胞阳性率显著上升（P<0.05），增殖标志因子Pax7的mRNA表达水平与对照组相比显著上升（P<0.05），分化标志因子MyoG、MyHC的mRNA表达水平与对照组相比无显著差异（P>0.05）。本研究发现一条新的lncRNA：lncbMD，其主要存在于牛骨骼肌卫星细胞和肌管的细胞核中，进一步研究结果表明干扰lncbMD后能够促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖，对牛骨骼肌卫星细胞的分化没有显著影响。
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