慢病毒介导Akt1 shRNA载体转染对人肝母细胞瘤细胞株HepG2凋亡和增殖的影响

作者：马体栋; 赵凡; 李碧香^*

来源：肿瘤药学, 2019, 9(04): 572-577.

• Akt1
• HepG2细胞
• 侵袭
• 增殖
• 凋亡

目的探究慢病毒介导Akt1 shRNA载体转染对人肝母细胞瘤细胞株HepG2凋亡和增殖水平的影响。方法以人肝母细胞瘤细胞株HepG2为研究对象,将其分为空白对照组(A组)、空白载体病毒组(B组)和ShRNA-Akt1慢病毒组(C组)。A组细胞未作任何处理,B组细胞转染空白载体慢病毒,C组细胞转染shRNA-Akt1载体构建的慢病毒。利用短发夹RNA(shRNA)干扰技术构建Akt1的基因下调载体,通过慢病毒转染HepG2细胞,qPCR和Western blotting检测凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Annexin-V/PI法检测细胞凋亡水平。结果 shRNA-Akt1载体慢病毒转染滴度为8×107 TU·mL-1。三组细胞的Akt1 mRNA相对表达量比较,差异均具有统计学意义(F=9.904,P=0.025),且C组显著低于A组和B组(q=3.092,2.009;P=0.019);三组细胞的Caspase-3和Caspase-9 mRNA相对表达量比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且C组显著高于A组和B组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,三组细胞的Akt1蛋白水平比较,差异均具有统计学意义(F=11.002,P=0.011),且C组显著低于A组和B组(q=2.887,2.457;P=0.014);三组细胞的Caspase-3和Caspase-9蛋白水平比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且C组显著高于A组和B组(P<0.05)。CCK-8结果显示,C组细胞增殖率显著低于B组和A组(q=2.009,3.901;P<0.05)。Transwell结果显示,C组细胞的侵袭能力显著低于B组和A组(q=2.127,2.157;P<0.05)。Annexin-V/PI结果显示,C组细胞凋亡率显著高于B组和A组(q=2.445,2.659;P<0.05)。结论慢病毒介导Akt1 shRNA载体可抑制HepG2细胞增殖和侵袭,并促进其凋亡,可作为肝癌的潜在治疗靶点。

• 单位
  湖南省儿童医院