脑钠肽的重组表达、纯化及其在临床检验质控中的应用

作者：李贺鑫; 汤小琨; 孙高远; 黄薇; 王璐瑶; 张俊华; 王萌; 邹丽辉^*

来源：生物技术, 2023, 33(05): 558-562.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.05.0083

• 脑钠肽
• 基因重组
• 蛋白质表达纯化
• 标准品
• 质控

[目的]制备脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)重组蛋白，为临床实验室检测BNP提供稳定可靠、方便快捷的质控品或参考品原料。[方法]优化BNP编码密码子，与麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein, MBP)编码基因及FXa识别序列一并克隆至表达载体pRSFDuet-1,在大肠杆菌工程菌BL21(DE3)中诱导表达，可溶性表达产物MBP-BNP经纯化、丝氨酸蛋白酶FXa切除MBP后，获得具有生物活性的BNP蛋白。[结果]将NPPB(natriuretic peptide precursor B,NPPB)基因参考序列内26%的罕见密码子全部替换成了大肠杆菌常用密码子，成功构建了重组表达质粒MBP-BNP-pRSFDuet-1,酶切、测序鉴定正确后转入BL21(DE3)获得可溶性高表达MBP-BNP融合蛋白的工程菌株。用镍柱和交联葡聚糖G50分子筛纯化后获得250 mg/L的MBP-BNP融合蛋白，经FXa切除MBP后得到1.65 mg/L的BNP蛋白，比临床实验室常规BNP检测区间上限高出约50倍。[结论]与传统的参考品制备方法相比，运用基因工程技术可在大肠杆菌中稳定可溶性表达浓度较高的BNP蛋白，可为临床实验室提供更方便快捷、质优价廉的质控品或标准品原材料，提供了理论基础和技术保障。

• 单位
  中国医学科学院; 北京医院