马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：林志雄; 鱼海琼; 王莹; 佟铁铸; 温肖会; 张利; 翟建新

来源：广东农业科学, 2019, 46(08): 123-128.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2019.08.017

• 马鼻肺炎
• 马疱疹病毒1型
• 马疱疹病毒4型
• 实时荧光PCR
• 特异性
• 敏感性
• 分型检测

【目的】建立快速、准确检测马疱疹病毒1型(EHV1)和4型(EHV4)的双重荧光定量PCR检测方法。【方法】以EHV1、EHV4的全基因组序列为基础,针对糖蛋白B(gB)基因的保守序列,分别设计EHV1与EHV4特异性引物和探针,筛选引物,优化反应条件,分型检测马疱疹病毒(EHV1、EHV4)。【结果】检测到EHV1、EHV4、EIV、EAV、EVJ和EIAV标准毒株,EHV1、EHV4为阳性结果,其余病毒为阴性结果;EHV1、EHV4 DNA模板的最低检出限为1.47×102 copies/μL;检测64份临床样本,阳性检出率为14.06%,病毒分离证实100%符合。【结论】双重荧光定量PCR检测方法可直接应用于检测并区分EHV1、EHV4,并可在短时间内获得对EHV1/EHV4特异性及敏感性的检测结果。

• 单位
  广东省农业科学院动物卫生研究所