微小RNA-4287调控人软骨细胞聚蛋白多糖酶-2表达的研究

作者：孙红; 张志奇; 毛谷平; 黄志宇; 余宝禧; 张程云; 傅明^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(05): 906-908.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.05.038

• 微小RNA-4287
• 骨关节炎
• 白细胞介素-1β
• 聚蛋白多糖酶-2

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-4287对人软骨细胞聚蛋白多糖酶-2(ADAMTS5)的调控作用及其机制。方法 从膝关节软骨组织中分离得到软骨细胞,白细胞介素(IL)-1β诱导软骨炎症模型,过表达或抑制细胞中miR-4287水平,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-4287和ADAMTS5 mRNA及蛋白表达,双荧光素酶报告基因方法验证miR-4287与ADAMTS5 mRNA 3’非翻译区(UTR)的结合效应。结果 miR-4287在人骨关节炎(OA)软骨组织中表达较正常软骨组织减少(0.354±0.167比1.074±0.507；t＝3.010,P<0.05),而ADAMTS5 mRNA表达升高(21.019±7.044比1.902±2.081；t＝－5.820,P<0.01)。与未刺激组比较,IL-1β刺激软骨细胞12 h后,miR-4287表达降低(0.454±0.095比1.010±0.166；t＝11.410,P<0.01),而ADAMTS5 mRNA表达增多(5.067±0.994比1.006±0.137；t＝7.306,P<0.05)。转染miR-4287模拟物48 h后,软骨细胞内ADAMTS5 RNA(0.620±0.366比1.023±0.269；t＝6.047,P<0.05)和蛋白表达均降低；而转染miR-4287抑制剂后,软骨细胞内ADAMTS5 RNA(2.502±0.625比1.018±0.226；t＝5.637,P<0.05)和蛋白表达均升高。结合位点为野生型时,过表达miR-4287能降低报告载体的荧光素酶活性(0.789±0.088比1.018±0.226；t＝2.806,P<0.05)；结合位点突变后,过表达miR-4287能则不能改变报告载体的荧光素酶活性(1.000±0.006比1.014±0.065；t＝0.364,P>0.05)。结论 miR-4287是人软骨细胞ADAMTS5表达的直接调控因子,可能在软骨基质代谢稳态维持方面具有重要的作用。

• 单位
  贵州医科大学; 中山大学附属第一医院