微RNA-23a通过缝隙连接蛋白43对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用机制

作者：宋希猛; 张卫红; 袁士龙^*

来源：脊柱外科杂志, 2023, 21(03): 177-183.

• 微RNAs
• 连接蛋白类
• 细胞分化
• 骨化,后纵韧带

目的 探讨微RNA(miR)-23a通过缝隙连接蛋白43(Cx43)对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用及相关机制。方法 选取本院收治的50例间断型颈椎后纵韧带骨化症（OPLL）患者（OPLL组）、50例颈椎外伤非OPLL患者（对照A组）和50例颈椎病非OPLL患者（对照B组）颈椎后纵韧带组织，培养后纵韧带细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组细胞miR-23a、Cx43 mRNA的表达，采用Western blotingt检测Cx43蛋白的表达。取OPLL组对数期后纵韧带细胞，分别转染miR-23a agomir质粒（miR-23a过表达组）、miR-23a antagomir质粒（miR-23a低表达组）、agomir NC质粒（转染对照组），未经处理的后纵韧带细胞为空白组。采用双荧光素酶实验验证miR-23a与Cx43的靶向关系；采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测矿化情况；采用Western blotingt检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达。结果 与对照A、B组比较，OPLL组miR-23a表达降低，Cx43 mRNA及蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P <0.05）。与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组miR-23a表达量升高、Cx43 mRNA表达量降低，miR-23a低表达组miR-23a表达量降低、Cx43 mRNA表达量升高，差异均有统计学意义（P <0.05）。双荧光素酶实验显示，miR-23a可有效抑制野生型质粒荧光素酶活性；与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低，miR-23a低表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P <0.05）。结论 OPLL病理条件下，颈椎后纵韧带细胞中miR-23a异常低表达，通过靶向上调Cx43激活MAPK信号通路，促进成骨分化。