全人源抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的构建

作者：王净; 王慧; 袁媛; 李青

来源：现代肿瘤医学, 2011, (11): 2139-2142.

• 全人源抗体库
• 乳腺癌
• 单链抗体(scFv)
• 噬菌体抗体库 human antibody library
• breast cancer
• scFv
• phage display antibody library

目的:利用噬菌体展示技术构建全人源性抗乳腺癌单链抗体库。方法:从临床获取未化疗乳腺癌病人外周血样30份,分离出单个核细胞(PBMC),提取总RNA,用RT-PCR技术逆转录获得cDNA,并扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR),在体外将两者连接成单链抗体(scFv)基因片段,将该片段用Sfi I和Not I酶切后克隆至pCantab5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,收集培养后平板上的菌落,即构建初级噬菌体单链抗体库。结果:得到长度约为360bp和340bp的VH和VL,拼接后得到的scFv长度约为750bp;经PCR初步鉴定插入率约为80%,Bs...

• 单位
  第四军医大学