犬癌胚抗原免疫梳检测方法的建立

作者：邓波; 陶田谷晟; 丰东升; 宋宇迎; 周雨璊; 杨显超; 张维谊^*

来源：上海畜牧兽医通讯, 2023, (02): 24-30.

DOI：10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2023.02.011

• 犬
• 癌胚抗原
• 包被
• 免疫梳
• 诊断

为建立一种犬癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)免疫梳检测方法，将包被鼠抗CEA捕获抗体固定于硝酸纤维膜(nitrocellulose filter membrane, NC膜)上，筛选出合适的包被液、包被温度、封闭液、封闭条件、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记抗体反应条件等，制备免疫梳。对建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验，并采用化学发光法和所建立的免疫梳检测方法对10份患恶性乳腺肿瘤病犬只的血清样品进行检测。优化条件：CEA捕获抗体质量浓度为100μg/mL,HRP标记抗体按1∶400(体积比)稀释，包被液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),包被温度为37℃,封闭液为3%BSA-PBS[含3%(质量分数)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)],封闭条件为4℃过夜，HRP标记抗体反应条件为37℃孵育1 h。建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法中CEA最低检出限为5 ng/mL,同时肿瘤标志物角蛋白8抗原、甲胎蛋白和前列腺抗原的检测结果均为阴性，重复性和稳定性良好；临床血清样品的免疫梳检测结果与化学发光法检测结果一致。研究结果表明：所建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法，可用于犬肿瘤疾病的初步诊断。

• 单位
  上海市动物疫病预防控制中心