犬上颌窦黏膜干细胞的培养和成骨性能的鉴定

作者：张静; 朱双喜; 彭伟; 李祥; 荣琼; 陈松龄

来源：口腔疾病防治, 2018, 26(07): 422-427.

DOI：10.12016/j.issn.2096-1456.2018.07.003

• 上颌窦黏膜
• 干细胞
• 成骨
• 碱性磷酸酶
• Runt相关转录因子2
• 骨桥蛋白
• 矿化结节

目的探讨犬上颌窦黏膜干细胞的成骨性能。方法取健康Beagle犬上颌窦黏膜,免疫磁珠法分选CD146阳性细胞,培养犬上颌窦黏膜干细胞。流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD146和CD44、CD34。犬上颌窦黏膜干细胞经基础培养(基础培养组)和成骨诱导培养(成骨诱导组)后,应用Real-time PCR、免疫组化法检测2组成骨相关基因mRNA和蛋白的表达,应用ALP测试盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用茜素红染色、Von KOSSA染色观察成骨诱导后矿化结节的形成。结果成功培养犬上颌窦黏膜干细胞,流式细胞术检测显示CD146和CD44阳性、CD34阴性。成骨诱导组犬上颌窦黏膜干细胞Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)(t=14.44,P<0.001)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)(t=7.85,P=0.001)和ALP mRNA(t=14.27,P<0.001)表达量明显高于基础培养组,差异均有统计学意义;成骨诱导组RUNX2和OPN蛋白表达水平增强。犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后,与基础培养组相比,ALP活性增高,3 d(t=8.79,P<0.001)、7 d(t=9.75,P<0.001)、14 d(t=12.14,P<0.001)、21 d(t=19.62,P<0.001)、28 d(t=17.53,P<0.001)时,成骨诱导组明显高于基础培养组;犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后茜素红和Von KOSSA染色可见到明显的矿化结节。结论犬上颌窦黏膜干细胞具有成骨能力。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 昆明理工大学; 广州中医药大学祈福医院; 云南省第一人民医院