生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

作者：罗盼; 吴伟莉^*; 金风; 龙金华; 李媛媛; 曾艳; 王子琪; 叶永英; 陈宇; 张芒; 唐红

来源：现代肿瘤医学, 2023, 31(15): 2823-2828.

• 鼻咽癌细胞CNE2
• 生物钟基因Per1
• JAK2-STAT3信号通路
• 侵袭迁移

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响，并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平；构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞；实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力；WB检测Per1基因对EMT相关蛋白：E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响；WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示：与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比，Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体，有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达，并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示：Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示：Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示：JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降，E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高，E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移，使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降，E-cadherin表达增加；干扰Per1基因后则相反，进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色；同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性，但其具体作用机制有待进一步研究。

• 单位
  贵州医科大学