棕榈酸酯通过调控p16INK4a/Rb信号通路诱导AC16人心肌细胞发生衰老表型改变

作者：李雯曦; 林添海; 彭程; 黄水金; 刘丰^*

来源：岭南心血管病杂志, 2023, 29(04): 433-442.

DOI：10.3969/j.issn.1007-9688.2023.04.17

• 棕榈酸酯
• 衰老相关分泌表型
• INK4a/Rb" name="keyword">p16INK4a/Rb
• 心肌衰老

目的 探讨棕榈酸酯(palmitic acid,PA)在AC16人心肌细胞衰老表型改变中的作用及机制。方法 AC16细胞分为(1)对照组PA浓度(0.08、0.19、0.3、0.8 mmol/L)组；(2)对照组，时间(24、36、48、72 h)刺激组。细胞计数试剂盒-8法测细胞总体活性，流式细胞术测细胞周期；活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒测细胞内ROS水平；β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色测染色阳性细胞率；酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)相关因子白细胞介素(interleukin,IL)-1A、IL-6、IL-8和干扰素(interferon,IFN)-γ浓度；实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)及Western blot测SASP及p16INK4a/视网膜母细胞瘤抑制蛋白(retinoblastoma protein,Rb)通路表达。为观察p16INK4a/Rb通路对心肌衰老表型影响，细胞分为4组：对照组、PA组、si-con组和si-p16INK4a组，qRT-PCR测p16INK4amRNA表达；Western blot测p16INK4a、p-Rb、Rb及IL-1A、IFN-γ蛋白表达；β-半乳糖苷酶染色测阳性细胞率。结果 随PA浓度及刺激时间增加，细胞活性不断下降，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，0.19 mmol/L PA组在G1期比例显著升高，S期显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。0.08～0.3 mmol/L PA组ROS水平高于对照组，PA组中β-半乳糖苷酶染色阳性率均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。0.19 mmol/L PA组IL-1A、IL-6、IL-8、IFN-γ浓度显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。0.19 mmol/LPA组IL-1A、IL-6、IL-8、IFN-γ及p16INK4a、Rb mRNA及蛋白表达明显高于对照组，而p-Rb蛋白表达下降，差异有统计学意义(P<0.05)。si-p16INK4a组IL-1A、IFN-γ蛋白表达及SA-β-Gal阳性率低于si-con组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 0.19 mmol/L PA可能通过调控p16INK4a/Rb通路诱导人心肌细胞衰老表型改变。

• 单位
  广州市第一人民医院