苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应

作者：向紫萍; 李妍洁; 马欢; 王杏; 张会欣^*; 王超^*

来源：中国中药杂志, 2023, 48(17): 4731-4737.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20230510.709

• 苦参碱
• 人脐静脉内皮细胞
• 炎症反应
• miR-25-3p
• Krüppel样转录因子4

研究苦参碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)炎症反应的影响，探讨其机制是否与miR-25-3p介导Krüppel样转录因子4(Krüppel like transcription factor 4, Klf4)途径有关。以TNF-α诱导建立HUVECs炎症模型。不同浓度苦参碱(0.625、1.25、2.5 mmol·L-1)作用24、48 h后，CCK-8方法检测细胞增殖。2.5 mmol·L-1苦参碱处理48 h后采用实时荧光定量PCR检测TNF-α、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、Klf4 mRNA表达和miR-25-3p表达，免疫印迹法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4蛋白表达。转染anti-miR-25-3p至HUVECs,上述方法检测miR-25-3p对TNF-α诱导的细胞增殖及相关炎症因子的表达。进一步转染miR-25-3p至细胞，与苦参碱共同孵育，检测增殖及炎症因子、miR-25-3p和Klf4表达的变化。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与Klf4靶向关系。结果显示，苦参碱能抑制TNF-α诱导的HUVECs增殖，降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达，提高Klf4 mRNA和蛋白表达、降低miR-25-3p表达；生物信息学分析显示，miR-25-3p与Klf4的序列存在特异性互补结合位点，双荧光素酶活性报告实验证实miR-25-3p在HUVECs中靶向负调控Klf4表达；抑制miR-25-3p表达可降低TNF-α诱导的细胞增殖、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达；过表达miR-25-3p能够逆转苦参碱对TNF-α诱导的细胞增殖及TNF-α、IL-6、IL-1β、Klf4 mRNA和蛋白表达的作用。实验结果表明苦参碱通过miR-25-3p介导Klf4途径抑制TNF-α诱导的HUVECs炎症反应。

• 单位
  石家庄学院; 河北省人民医院; 华北理工大学