犬附红细胞体PGK的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

作者：宋淇淇; 钱丽敏; 苏苗; 于晓雪; 秦顺义; 龚岳

来源：天津农学院学报, 2018, 25(03): 42-46.

DOI：10.19640/j.cnki.jtau.2018.03.009

• 犬附红细胞体
• 磷酸甘油酸激酶
• 原核表达
• 纯化
• 多克隆抗体

为了原核表达、纯化犬附红细胞体磷酸甘油酸激酶(PGK),并制备多克隆抗体,本试验从NCBI中已公布的犬附红细胞体(Mycoplasma haemocanis)全基因组序列中,调取其磷酸甘油酸激酶(PGK)的基因序列,并选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pgk,插入质粒pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-pgk,转化E. coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,利用Western-blot方法检测表达产物,表达产物经镍离子亲和层析纯化后免疫昆明小鼠,获得鼠抗犬附红细胞体PGK多克隆抗体,并利用间接ELISA法检测血清抗体效价。结果表明:成功构建了pET32a(+)-pgk原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,重组蛋白相对分子质量约为60 ku,在包涵体和上清中均有表达,经镍离子亲和层析获得了纯度较高的目的蛋白,利用纯化后的蛋白所制备的鼠抗血清效价可达1∶51 200。

• 单位
  天津农学院