小反刍兽疫病毒酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-tH的构建、表达和鉴定

作者：蒙学莲; 朱学亮; 翟军军; 窦永喜; 才学鹏

来源：中国兽医学报, 2011, (04): 509-512.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.04.005

• PPRV-tH
• 载体构建
• 诱饵蛋白
• 酵母双杂交系统 PPRV-tH
• vector construction
• bait protein
• yeast two-hybrid system

利用PCR技术扩增获得PPRV-tH基因片段,将其克隆至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,经酶切、测序验证其正确插入后,将重组诱饵质粒转化酵母菌AH109中,检测其在酵母中有无渗漏、自我激活作用和毒性。利用Western blotting分析诱饵蛋白在酵母中的表达情况,以鉴定其作为诱饵蛋白的可行性。结果表明,成功扩增到了PPRV-tH,并正确构建了pGBKT7-tH诱饵表达载体,此载体在酵母细胞AH109中无毒性、渗漏和自我激活能力,且能正确表达tH蛋白。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室