鹿儿岛被毛孢分生孢子胞外粘液蛋白提取与鉴定

作者：段林; 邹晓; 瞿娇娇

来源：微生物学通报, 2021, 1-9.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.210321

• 鹿儿岛被毛孢
• 胞外粘液蛋白
• 温和洗脱法
• 附着性

【背景】分生孢子表层粘液在虫生真菌与昆虫的互作中扮演着重要角色。鹿儿岛被毛孢是寄主专一、孢子表面具粘液层的虫生真菌，但其胞外粘液成分尚不清楚。【目的】优化鹿儿岛被毛孢分生孢子粘液蛋白的提取方法，对粘液蛋白组分进行质谱鉴定，探究分生孢子胞外粘液的蛋白成分。【方法】用低浓度还原剂二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT）对胞外粘液进行温和洗脱并优化提取条件，聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis，SDS-PAGE）检测蛋白提取浓度，用碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）染色法检测孢子细胞膜选择通透性，通过肽段酶解、LC-MS/MS数据采集及蛋白质比对分析鉴定。【结果】鹿儿岛被毛孢分生孢子粘液蛋白的最佳提取方法为：孢子浓度为5×107 cells/mL，DTT浓度为2 mmol/L，4 ℃提取24 h，而且粘液蛋白提取后不影响孢子细胞膜通透性。提取的粘液蛋白共鉴定到蛋白质77个，蛋白丰度排前10的蛋白多为分泌性小分子蛋白，包括未注释的蛋白、几丁质酶、脂酶或是与昆虫体壁降解相关酶类。【结论】鹿儿岛被毛孢胞外粘液中富含与寄主识别、穿透相关的蛋白质，与被毛孢的粘附、识别功能密切相关。

• 单位
  贵州大学; 生命科学学院