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摘要
目的通过抑制大鼠肺组织细胞内活性氧(ROS)活性,探讨ROS在肺组织细胞线粒体凋亡介导肺纤维化中的作用及矽肺的发病机制。方法 24只SD成年雄性大鼠,体质量为180220g,随机分为生理盐水对照组、矽肺模型组和N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)干预组,每组8只。矽肺模型组和NAC干预组大鼠采用非气管暴露法一次性肺内注入50g/L二氧化硅悬浊液1ml,对照组注入等体积生理盐水,NAC干预组自造模当天起每天以灌胃方式给予600mg/kg NAC 1ml,各组动物均可自由进食和饮水。造模28d后统一处死所有实验动物,收集左侧肺灌洗回收液,分离纯化肺组织细胞,流式细胞仪检测肺组织细胞内ROS含量和线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,MTP)的变化水平;另取灌洗侧肺组织,Trizol固定,检测I型和III型前胶原mRNA表达水平;将灌洗侧部分肺组织裂解,免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织内细胞色素C(CytC),天冬半胱氨酸特异性蛋白-9(cysteinyl aspartate specific protease-9,Caspase-9)和Caspase-3的表达水平;右侧肺组织用多聚甲醛固定,苏木精-伊红(HE)染色,制作病理标本,观察肺组织病理变化及肺纤维化程度。结果 NAC干预组大鼠ROS含量和线粒体去极化率均较矽肺模型组低,但高于生理盐水对照组(P<0.05);矽肺模型组大鼠肺组织内CytC、Caspase-9、Caspase-3及I型和III型前胶原mRNA的表达水平最高,NAC干预组各指标均高于生理盐水对照组(P<0.05);NAC干预组大鼠肺组织纤维化病变较矽肺模型组减轻,但仍高于生理盐水对照组。结论被NAC干预的染矽尘大鼠肺组织细胞内ROS活性被抑制后,线粒体凋亡信号转导通路被阻断,肺组织纤维化程度减轻。因此,ROS可能在肺组织细胞线粒体凋亡致肺纤维化中发挥重要的作用。
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