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摘要
目的血清抗环瓜氨酸化蛋白抗体(抗CCP抗体)检测对类风湿关节炎(RA)诊断具有高度的敏感性及特异性,是一种RA早期诊断指标。尽管抗体已被发现多年,但是其所针对的天然靶抗原仍不十分清楚。本试验通过合成兔抗CCP抗体免疫亲和层析柱,提取RA患者及健康人血清中瓜氨酸化相关抗原,并通过蛋白质组学技术对提取的具有差异性的瓜氨酸化蛋白进行鉴定。方法抗CCP抗体阳性血清取自2010年12月至2011年7月本院门诊及住院RA患者,正常血清取自健康献血者及体检者。体外人工合成CCP肽(HQCHQESTXGRSRGRCGRSGS),制备并纯化兔抗CCP多克隆抗体。将纯化的兔抗CCP抗体与高流速NHs-活化琼脂糖偶联制作免疫亲和柱,提取RA患者抗CCP抗体阳性血清及正常血清中的瓜氨酸化蛋白质,通过二维电泳将提取蛋白分离,分析并筛选二者有差异蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析进行蛋白鉴定。结果通过兔抗CCP抗体-高流速NHs-活化琼脂糖免疫亲和层析纯化、二维电泳和基质辅助激光解吸电离飞行质谱分析,获得了差异性及重复性很好的差异蛋白图谱,将RA患者ACCP阳性血清和正常血清亲和层析提取蛋白2-D图谱比对发现,RA提取蛋白二维凝胶电泳图谱中共312蛋白点,正常血清提取蛋白有274个蛋白点,其中有166个具有差异表达的蛋白点。在差异蛋白点中,有101个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,65个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。52个蛋白点RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失,16种蛋白在RA患者血清提取蛋白中表达而在正常血清提取蛋白缺失。挑选其中差异明显并且灰度值较高的的51个点进行鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出多种可能与RA发病相关的蛋白。在选取的51个蛋白点中,有30个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达上调,21个蛋白点在RA患者血清提取蛋白中表达下调。结论在RA患者与健康者血清蛋白中发现部分差异表达的瓜氨酸化蛋白,这些差异蛋白可能成为涉及RA发病机制的自身抗原,为进一步研究RA的发病机制奠定了基础。
