旋毛虫Hsp70与Ts87融合蛋白的构建表达及鉴定

作者：孙靓; 孙青; 房磊; 杨静; 顾园; 毕阔; 诸欣平

来源：寄生虫与医学昆虫学报, 2015, 22(01): 1-6.

DOI：10.3969/j.issn.1005-0507.2015.01.001

• 旋毛虫
• 融合蛋白
• 热休克蛋白70
• 排泄分泌抗原
• 疫苗

本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70(Ts-Hsp70)与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白,并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRⅠ酶切位点将目的基因Ts-Hsp70与Ts87相连接,插入p ET28-a(+)质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达、纯化,获得的融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87用Western blot的方法鉴定。经PCR、酶切鉴定、测序分析,结果显示,目的基因片段大小为2 721bp,构建的重组质粒与预期相符。经IPTG诱导表达,通过镍离子柱层析纯化复性后得到可溶的融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87,其相对分子质量约为100 k Da;Western blot结果显示,该蛋白可被抗His标签单抗、r TsHsp70免疫血清、r Ts87免疫血清识别。以上结果表明,本研究成功构建并表达了融合蛋白r Ts-Hsp70-Ts87,为进一步研究r Ts-Hsp70-Ts87的免疫保护性,开发新的有效抗旋毛虫病的疫苗奠定基础。

• 单位
  基础医学院; 首都医科大学