犬瘟热病毒融合蛋白的真核细胞表达及鉴定

作者：白桂杰; 张同存; 校海霞^*

来源：今日畜牧兽医, 2020, 36(05): 5-7.

• 犬瘟热病毒
• 融合蛋白
• 抗原性
• 表达
• ELISA

目的:通过293T真核细胞表达犬瘟热病毒融合蛋白,并鉴定其抗原性。方法:利用PCR方法扩增犬瘟热病毒(Onderstepoort株)的融合蛋白胞外段,在C末端引入氨基酸突变和His标签,插入pFuse载体,构建重组质粒pFuse-CDV-sF-ecto。将重组质粒转染293T细胞,72～96h后收上清,通过镍离子亲和层析和凝胶层析纯化目的蛋白,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定sF-ecto蛋白抗原性。结果 :细胞上清先经His-TrapTM富集,而后用Superdex 200 10/300GL纯化,出峰体积为8.43 mL,由出峰位置判断表达的CDV-sF-ecto蛋白为多聚体。ELISA检测发现CDV-sF-ecto与商业化犬瘟热病毒单克隆抗体有较高反应值。本研究成功表达了犬瘟热病毒融合蛋白的胞外段,并证明该蛋白对犬瘟热病毒特异性单克隆抗体有较高的结合活性。

• 单位
  生物工程学院; 天津科技大学; 中国科学院天津工业生物技术研究所