坐骨神经损伤后长链非编码RNA的聚类分析及长链非编码RNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响

作者：罗选翔; 潘彬; 冯虎^*

来源：中华解剖与临床杂志, 2022, 27(08).

• 周围神经损伤
• 坐骨神经损伤
• 长链非编码核糖核酸 MX1
• 雪旺细胞
• 模型, 动物

目的探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA(LncRNA)差异表达的基因, 以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只, 随机分为0 d(T0)、3 d(T1)、7 d(T2)和14 d(T3)4组, 每组6只, 建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA, 制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析, 筛选出各个时间点发生差异表达的基因, 并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞, 分为对照组、Control siRNA组(siRNA组)和LncRNA MX1 siRNA组(siRNA-MX1组), 使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况, 采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力, 采用5-乙炔基-2’’-脱氧尿苷(EDU)实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果各组大鼠均造模成功, 实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示, 与T0组比:T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达, 其中1 634个LncRNA基因表达上调, 1 432个LncRNA基因表达下调;T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达, 其中1 634个LncRNA基因表达上调, 864个LncRNA基因表达下调;T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达, 其中有1 643个LncRNA基因表达上调, 1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大, 差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示, 转染LncRNA MX1 siRNA后, siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2, 低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2, 差异有统计学意义(F=78.47, P<0.001);而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义(P>0.05)。迁移、增殖试验结果显示, siRNA-MX1组细胞迁移数量为(24.1±4.2)个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%, 低于对照组的(50.3±7.8)个、44.1%±7.2%和siRNA组的(49.2±6.2)个、41.8%±7.0%, 差异均有统计学意义(F=93.15、121.26, P值均<0.001);而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著, 下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。

• 单位
  徐州医科大学