慢病毒载体介导RNAi稳定抑制XIAP表达及对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的实验研究

作者：易小平; 江春; 宰红艳; 邓公平; 欧阳洋; 周达全; 纪连栋; 李宜雄

来源：现代生物医学进展, 2009, (22): 4201-4205+4211.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2009.22.052

• 胰腺癌
• RNA干扰
• X-连锁凋亡抑制蛋白
• 慢病毒载体
• 细胞增殖

目的:探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的抑制效率及对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,建立XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株。方法:应用pGCSIL-PUR慢病毒载体构建针对XIAP的ShRNA载体,转染包装细胞293T,收集病毒上清转染胰腺癌细胞系SW1990,经嘌呤霉素(puromycin)筛选并扩大培养得到稳定克隆;实时荧光定量PCR和western-blot免疫印迹检测癌细胞内XIAP的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;caspase 3/7活性测定和DAPI染色检测细胞凋亡。结果:成功构建3个XIAP-ShRNA慢病毒载体(X1、X2、X3)及XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株,对XIAP的抑制效率均达70%以上;MTT检测显示X1、X3稳定抑制XIAP后胰腺癌细胞增殖明显减慢,但caspase 3/7活性及细胞凋亡并没有明显增加。结论:慢病毒载体介导的靶向XIAP的RNAi可有效抑制XIAP表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力;成功建立的XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株为进一步研究打下基础。

• 单位
  中南大学湘雅医院