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摘要
【背景】十足目虹彩病毒1 （Decapod Iridescent Virus 1，DIV1）可感染南美白对虾、中国对虾和日本对虾等，是危害对虾养殖业的主要病毒之一。当前高效、快速、简便地检测对虾是否感染DIV1是减少其发生和危害的重要途径。【目的】将成簇的规律间隔短回文重复序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats，CRISPR）及其相关蛋白12a （CRISPR Associated Protein 12a，Cas12a），即CRISPR-Cas12a系统，与重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）相结合，建立快速检测DIV1的方法（RPA-Cas12a），并探讨该方法在实际样本检验中的应用价值。【方法】通过提取DIV1 DNA，设计其RPA引物、crRNA以及报告探针，优化并建立CRISPR-Cas12a结合重组酶介导的快速检测方法，进一步分析该方法检测DIV1的灵敏度与特异性，并比较建立的方法与qPCR法的一致性。【结果】建立的RPA-Cas12a快速检测方法可在40 min内实现对虾样本DNA中DIV1的检测，检测限为10 copies/reaction。用该方法分别对对虾白斑病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）、传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus，IHHNV）、虾肝肠胞虫（Enterocytozoon Hepatopenaei，EHP）以及DIV1进行检测，结果仅DIV1发生特异性反应，而WSSV、IHHNV和EHP的检测结果均为阴性。采用RPA-Cas12a检测61份实际样本，结果均与qPCR检测法的阳性检出率一致。【结论】建立的RPA-Cas12a方法检测十足目虹彩病毒1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点，为十足目虹彩病毒1的快速检测提供了新的工具。
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