诺如病毒P2结构域的原核表达及其抗血清制备

作者：陈健伟; 李浩; 明雪薇; 王斌; 邓建平; 陆峙金; 杜云霄; 蔡璐; 唐秋阳; 李再新; 张智^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 1-8.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003912

• 诺如病毒
• P2蛋白
• 原核表达
• 抗血清

目的 应用原核表达系统表达并纯化5种基因型（GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17）诺如病毒（norovirus,NV）的P2结构域，并制备其抗血清。方法 利用生物信息学方法分析不同基因型NV P2序列保守性，合成P2 DNA序列，亚克隆至pET24a载体，构建重组原核表达质粒，转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达。表达的重组P2蛋白纯化后免疫30只雌性BALB/c小鼠，制备抗血清。通过ELISA法检测抗血清的滴度和交叉反应，Western blot法检测抗血清的特异性，点杂交法分析抗血清对野生病毒的识别与结合能力。结果 表达的重组P2蛋白相对分子质量约15 000，纯度均达90%以上，GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17型P2蛋白表达量分别为60、26.4、19.8、16.3和33.3 mg/L。针对5种基因型NV P2抗原的抗血清滴度均达1∶128 000以上，均能很好地识别自身相应的P2抗原，但不与不相关P2抗原相互作用，均不与重组人A组轮状病毒VP7抗原和重组幽门螺杆菌尿酶抗原发生交叉反应，且对野生型NV具有较好的识别与结合能力。结论 利用原核表达系统成功表达并纯化了我国流行的5种基因型NV P2抗原，制备的抗血清滴度较高，特异性良好，为NV快速、现场诊断技术的建立奠定了基础。

• 单位
  四川轻化工大学; 生物工程学院