CYP3A4基因启动子受AFB1调控位点的鉴定

作者：张岩; 徐丹丹; 范启明; 陈雯; 王庆

来源：热带医学杂志, 2016, 15(05): 576-579+586.

• 黄曲霉毒素B1
• CYP3A4
• 启动子
• 双荧光报告

目的构建不同长度人CYP3A4基因启动子荧光素酶报告质粒并予鉴定,检测L02细胞中各荧光素酶报告质粒相对荧光素酶活性,并分析AFB1处理对其影响,找出AFB1调控人CYP3A4基因可能的启动子区域。方法采用PCR技术扩增不同长度人CYP3A4基因启动子片段,将其插入荧光素酶报告质粒p GL3-basic中荧光素酶编码序列之前,构建含不同长度CYP3A4启动子的报告质粒p GL3-basic-CYP3A4-1~7,将报告质粒转染L02细胞,检测其荧光素酶活性来表示CYP3A4对应启动子片段的转录活性。检测各报告质粒在AFB1处理下与DMSO对照相比荧光素酶活性上升的比例,找出AFB1上调CYP3A4启动子转录活性的作用区域。结果报告质粒测序结果证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将报告质粒转染L02细胞,AFB1和DMSO处理后检测结果表明p GL3-basic-CYP3A4-1~6和p GL3-basic-CYP3A4-7相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异有统计学意义(P<0.05),p GL3-basic-CYP3A4-1至p GL3-basic-CYP3A4-6这6个报告质粒相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了人CYP3A4基因不同长度启动子片段的荧光素酶报告质粒,并初步确定AFB1可以通过调控CYP3A4启动子-200~0 nt的结合位点来上调CYP3A4的转录活性。

• 单位
  中山大学公共卫生学院