NF-κB相互作用多肽原核表达载体的构建、表达与纯化

作者：史海水; 梁华平; 徐祥; 李生茂

来源：河北大学学报(自然科学版), 2005, (05): 530-534.

• NF-&kappa
• B
• 多肽
• 蛋白表达

为了获得高纯度的可溶性NFκB相互作用多肽,首先以酵母双杂交技术筛选获得的NFκB相互作用多肽的酵母表达质粒pGAD GH/pp10为模板,扩增多肽基因片段,后经BglⅡ,StuⅠ双酶切后连接到pET42a（+）载体中,构建GST/多肽融合蛋白的原核表达载体,并将GST/多肽融合蛋白的原核表达载体转化入BL21菌株,用0.4 mmol/L IPTG于30℃诱导表达4 h,后经GST亲和纯化GST/多肽融合蛋白,SDSPAGE电泳鉴定融合蛋白的表达和纯度.实验结果表明,成功地构建了NFκB相互作用多肽的GST/多肽融合蛋白原核表达载体,进行了GST/多肽融合蛋白的诱导表达,融合蛋白的表达为可溶性表达,最终纯化获得纯度约为80%的可溶性GST/多肽融合蛋白,这将为后继利用GST pulldown,Biosensor,EMSA等实验进一步验证NFκB相互作用多肽的功能提供可靠的材料来源奠定基础.

• 单位
  河北医科大学; 第三军医大学大坪医院