己酮可可碱对叔丁基过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

作者：刘萌萌; 赵晨茜; 郭鹏; 刘江正; 孔德钦; 任晓婷; 刘瑞; 海春旭; 张晓迪^*

来源：空军军医大学学报, 2023, 44(03): 210-215.

DOI：10.13276/j.issn.2097-1656.2023.03.004

• 叔丁基过氧化氢
• 氧化应激
• 己酮可可碱
• 线粒体

目的 探讨己酮可可碱(PTX)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激和线粒体功能的影响。方法 利用t-BHP诱导建立HUVECs损伤模型，PTX预处理筛选合适的干预剂量；Mito Tracker Green、Mito SOX和Rho 123探针分别检测线粒体质量、活性氧(ROS)和膜电位的改变；设置对照组、t-BHP组、PTX预处理组和单纯PTX组，对照组细胞不做处理，t-BHP组细胞用105μmol/L t-BHP处理，单纯PTX组用1 mg/L PTX处理，PTX预处理组用105μmol/L t-BHP和1 mg/L PTX共同处理。采用MTT法检测细胞的活力；试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和三磷酸腺苷(ATP)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力；Western blotting法检测细胞中SOD1、SOD2和核转录因子相关因子2(Nrf-2)蛋白表达水平；定磷法检测HUVECs细胞Na+,K+-ATPase和Ca2+,Mg2+-ATPase的活力。结果 霍恩氏法计算并测得HUVECs在t-BHP暴露6 h的半数致死量为105μmol/L;PTX预处理12 h、浓度大于1 mg/L即可升高HUVECs细胞活力(P<0.05);与对照组相比，t-BHP处理后，Mito Tracker Green和Rho 123绿色荧光强度下降，Mito SOX红色荧光强度升高；与t-BHP组相比，PTX预处理组能提高HUVECs细胞活力，降低细胞培养上清中LDH、MDA和GSSG水平，细胞中SOD活力以及Nrf-2蛋白表达水平(P<0.05),升高HUVECs培养上清中GSH水平和GSH/GSSG比值、细胞中SOD1蛋白表达水平、ATP水平以及Na+,K+-ATPase和Ca2+,Mg2+-ATPase活力(P<0.05)。结论 PTX对t-BHP诱导的HUVECs氧化应激和线粒体损伤有保护作用。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 武警后勤学院