携带小鼠HVEM的重组腺相关病毒载体的构建及鉴定

作者：马衣努尔.买提托合提; 韩凌斐; 廖术杰; 周志刚; 董红; 马丁; 王世宣

来源：华中科技大学学报(医学版), 2010, 39(02): 179-183.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2010.02.009

• 疱疹病毒侵入介体
• 腺相关病毒
• 基因治疗 herpes virus entry mediator
• adeno-associated virus
• gene therapy

目的克隆小鼠疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因,构建其重组腺相关病毒载体,鉴定目的基因在真核细胞中表达。方法用RT-PCR法从小鼠脾脏淋巴细胞克隆出全长HVEM基因,构建携带HVEM基因的穿梭质粒pAAV-IRES-HVEM-hrGFP和辅助质粒pAAV-RC及pAAV-Helper,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入AAV-293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-HVEM。用氯仿-PEG8000法纯化病毒,实时荧光定量PCR测病毒滴度。RT-PCR检测rAAV-HVEM在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达情况。结果成功构建组装重组小鼠HVEM腺相关病毒,纯化后...

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院