HPV-16 E6、E7基因慢病毒真核表达载体的构建及鉴定

作者：方芳; 胡尔西旦·尼牙孜; 武贵臻; 阿布力孜·阿布杜拉; 盛磊

来源：新疆医科大学学报, 2015, 38(06): 734-738.

• 宫颈癌
• HPV16
• E6、E7基因
• 慢病毒载体

目的构建人乳头瘤病毒(HPV)E6、E7基因慢病毒真核表达载体。方法以Si Ha宫颈癌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出E6、E7目的片段;选用病毒载体p Lenti6/V5 Directional TOPO Cloning Kit系统构建E6、E7基因慢病毒真核表达载体;分别使用构建好的E6、E7载体转染病毒包装细胞,获得含病毒的上清液,并测定上清液中慢病毒的滴度。结果质粒测序所得序列与人乳头瘤病毒E6、E7基因序列完全吻合,载体构建成功;慢病毒滴度测定结果显示E6样品的慢病毒滴度为1.5×108TU/m L,E7样品的慢病毒滴度为2×108TU/m L,该滴度能够满足后续研究所需。结论 HPV-16 E6、E7基因慢病毒真核表达载体构建成功,可以为进一步研究人乳头瘤病毒E6、E7基因致病机理奠定物质基础。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院