兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用

作者：陈萌萌; 潘渊婷; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 仇汝龙; 朱伟峰; 徐为中; 王芳^*

来源：江苏农业学报, 2019, 35(06): 1397-1401.

• 兔源抗凋亡蛋白Bcl-2
• 原核表达
• 亲和层析
• 多抗制备

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。

• 单位
  江苏省农业科学院; 农业部