错配修复基因hMLH1启动子萤光素酶报告基因载体的构建与鉴定

作者：卢俊宇; 金鹏; 高巍; 陆晓娟; 王亚婷; 盛剑秋

来源：基础医学与临床, 2012, (04): 338-341.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2012.04.004

• 错配修复基因
• hMLH1
• 启动子
• 雌激素
• 双萤光素酶报告基因 mismatch repair gene
• promoter
• estrogen
• dual-luciferase reporter gene

目的构建含hMLH1启动子片段的萤光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素诱导下的转录活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增hMLH1启动子片段(-1 953/+53),插入萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic,将重组质粒转入HEK293细胞,检测在有和无雌激素诱导下萤光素酶的活性变化。结果酶切和测序结果证实重组萤光素酶报告基因载体pGL3-Promoter1-luc构建成功。转染pGL3-Promoter1-luc后,雌激素诱导的萤光素酶活性为7.45±0.81,显著高于无水乙醇组的3.28±0.19(n=3,P<0.001)。结论 hMLH1启动子片段存在与雌激素相关的调控序列。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 北京军区总医院; 北京协和医学院; 第三军医大学